考马斯亮蓝g250-糖原合成酶激酶(gsk3β)抗体-上海联硕生物科技有限公司

产品分类
您现在的位置:首页 > 技术文章 > 固体样本处理方法
固体样本处理方法
  • 发布日期:2024-07-04      浏览次数:185
    • 固体样本处理方法:
              固体样本处理原则:称取1g的固体样本,用9g的合适缓冲液溶解,分泌蛋白可以直接离心取上清检测,细胞内的蛋白,要先收集细胞,再用合适方法破碎,离心取上清测试。


      1、组织标本:切割标本后,称取1g组织,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。对于植物组织,不好匀浆的话,就用液氮研磨,将植物组织放在研钵中,加入适量液氮,充分研磨。

      2、细胞内蛋白样本:
      许多待测蛋白不是分泌蛋白,而是存在于细胞内的蛋白,这个时候,要先收集细胞,洗涤干净,再破碎细胞,离心取上清。
      (1)培养的细胞
      A、动物细胞:用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液,使细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融(如果反复冻融,破碎效果不好,就采用超声波破碎),以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
      B、植物细胞:用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液,使细胞浓度达到100万/ml左右,置于冰盒上,用超声破碎仪,设置破碎2s,冷却30s的方式,充分破碎细胞,以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
      (2)组织的细胞
      切割标本后,称取1g组织,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),去除上清,再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗涤沉淀的细胞三遍。再用上述的细胞破碎方法破碎细胞。

      3、土壤:称取1g土壤,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工将标本充分混匀。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。如果是测分泌蛋白,直接取上清检测,测试细胞内蛋白,要破碎细胞。

      4、咽拭子:加入2g的pH7.2-7.4左右的PBS,溶解咽拭子头部,摇匀,用镊子取出咽拭子并挤干液体,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。如果是测分泌蛋白,直接取上清检测,测试细胞内蛋白,要破碎细胞。

      5. 植物标本的采集及保存
      1、 称取0.1g(误差±3%以内)新鲜植物组织样本,在液氮中充分研磨;
      2、 加入1ml的提取液(80%甲醇), 置于-20度过夜;
      3、 于4度,8000rpm,离心1小时,取上清;
      4、 上清液过C-18固相萃取柱。具体步骤是: 80%甲醇(1ml)平衡柱→上样→收集样品→移开样品后用100%甲醇(5ml)洗柱→100%乙m(5ml)洗柱→100%甲醇(5ml)洗柱→循环。过柱后的样本真空干燥或氮气吹干,保存备用;
      5、 上样前加入pH7.4 PBS缓冲液(1ml定容)。混匀后室温放置30分钟,然后4度离心(8000rpm,15分钟),取上清并暂时保存于4度待用。


      样本收集注意事项
      1、不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
      2、标本采集后尽快进行实验,若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
      3、我们罗列的是通用的样本处理方法,无法涵盖各种样本,对于一些特殊样本,建议实验人员多参考已发表的文献,自行设计合理的样本处理方法。


    酸碱浓度计传感器| 设备配套吸尘器| 变电站用防爆空调| 环卫喷洒车厂家| 河南机制砂设备厂家| S01| STM566SATRA拉力试验机| TRIMOS测高仪| 蓄电池活化仪| 阳光模拟试验箱| 海兴净化设备| 叠瓦电池片拉力试验机| 角行程电动执行机构| 走航式微波辐射计| 钻铣攻牙机一体机| 电动车电测系统| 金属切削件.紧固件| 芬兰Kibron| 手表式近电报警器| 宁波色差仪| 中低压电路计量模块| 高温流淌性试验仪| 西门子电磁流量传感器| 不干胶贴标机| 增压助燃高压漩涡风机| 上海申劢工业设备| 包装厂| 椰子切半机| 敏泰风电滤芯| ABI| 炭黑分散度测定仪| 液位探头| 水冷式温度冲击试验箱| 砂基透水砖透水速率测试仪| 全不锈钢洁净门| 打磨机专用除尘器| 彩钢瓦薄卷| 滤池用石英砂价格| 土壤样品干燥箱| 汽车门锁测试盒| UL认证电表|