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详细分析纤维素 DE-52的操作步骤
  • 发布日期:2020-06-26      浏览次数:1071
    •   纤维素 DE-52采用平均粒径为50μm的颗粒型亲水高分子聚合物,表面又用大分子糖链接枝,使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性,它在高流水下保持更高载量,同时又具有更好的分辨率。由于比表面积大,平衡和洗脱的时间也更短。它经过接枝即使是纯化病毒,质粒等超大分子的物质,载量基本保持不变。本产品物理和化学稳定性好,使用寿命长,操作方便。
       
        操作步骤:
        1、纤维素 DE-52的处理:DE52经酸、碱处理,0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl平衡。
        2、装柱:将层析柱固定于滴定架上,柱底垫一圆形尼龙纱,出口接一细塑料管并关闭出水。将浸泡于0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl中的DE52沿玻璃棒倒入柱中,待DE52自然沉降3~5cm高时,吸除0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl,或松开出水口螺旋夹,控制流速1~2ml/min,同时连续加入DE52至所需高度。待DE52*沉降后,柱面放一圆形滤纸片。
        3、平衡:松开出水口螺旋夹,以0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl平衡,控制流速为15滴/min,待流出液与洗脱液之pH值达到一致时,停止平衡。
        4、待提取样品的准备:将蛋白装入透析袋里,置4℃冰箱,对0.01mol/L pH8.6 Tris-Cl透析过夜。
        5、加样、洗脱与收集:用吸管吸去柱面液体,以毛细吸管沿柱壁加入样品,样品体积相当于柱床体积的1%~2%,蛋白浓度为50~70mg。启开出水口螺旋夹使样品缓慢进入柱床内,并用少量洗脱液清洗柱壁;待液体进入柱床后,以0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl洗脱,控制流速为14~16滴/min。分部收集器收集,紫外监测,或人工收集,以紫外分光光度计分别测定每管280nm OD值,描绘洗脱液峰。
        6、浓缩:将洗脱液的280nm OD上峰段与下峰段各管分别合并,装入透析袋,以PEG浓缩至所需体积。
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